Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Ранее нами изучалось влияние гирудотерапии на заживление кожных ран у крыс. Было установлено, что при воздействии пиявок на кожный дефект наблюдается ускорение процессов дифференцировки клеток эпидермиса, усиление ангиогенеза, уменьшение объема фиброзной ткани, усложнение архитектоники коллагеновых и эластических волокон рубца [1, 2, 3].
В настоящем исследовании изучалось влияние гирудотерапии на составные компоненты фиброзной ткани – клеточные элементы, интерстиций, коллагеновые и эластические волокна по их удельным площадям.
Работа выполнена на 20 белых беспородных половозрелых крысах. Животным под эфирным наркозом в межлопаточной области наносили полнослойный кожный дефект размером 1,5 х 1,5 см. После полной эпителизации раны (которая в среднем наступала на 18 сутки) крысы были разделены на четыре группы: I - контрольная, кожные дефекты этих животных никаким воздействиям не подвергались; II, III и IV – опытные группы, им проводили сеансы гирудотерапии через 20, 30 и 60 суток после операции соответственно. Постановку пиявок осуществляли непосредственно на область рубца трехкратно на 20 минут через два дня на третий.
Забор материала проводили через 100 суток после операции. Кусочки ткани с участком регенерата фиксировали в нейтральном формалине и обезвоживали в спиртах восходящей концентрации. Готовили парафиновые поперечные срезы толщиной 5 мкм и окрашивали их гематоксилином - эозином, по Маллори и по Вейгерту.
Морфометрические исследования проводили на микроскопе «Биолам-Р-15» и на анализаторе изображений «Видео – Тест – Мастер». Для количественной оценки склеротических изменений сформировавшегося регенерата определяли удельные площади клеточных элементов фиброзной ткани, основного аморфного вещества, коллагеновых и эластических волокон при помощи анализатора видеоизображений в автоматическом режиме выделений. Выделение объектов производилось по различиям яркости их окраски. Удельная площадь вычислялась как отношение площади отдельного элемента к общей площади изображения и выражали в процентах.
При определении удельной плотности всех составных компонентов фиброзной ткани кожного регенерата можно отметить, что во всех группах животных преобладают коллагеновые волокна. Их количество составило от 55,571,15% до 42,23,43%, в то время как удельная площадь интерстиция колебалась от 14,961,95% до 24,852,51%, а клеточных элементов от 11,481,45% до 15,860,57%. Эластические волокна в составе соединительно-тканного остова рубца занимают от 13,610,83% до 15,980,19%.
Гирудотерапия существенно и достоверно уменьшает количество коллагеновых волокон кожного регенерата в процессе ремоделирования рубца. Так, в первой группе животных их удельная площадь достоверно больше по сравнению со всеми опытными группами – 55,571,15% (р<0,01), в то время как во второй группе этот показатель составил – 51,032,82%; в третьей – 44,312,02%; в четвертой – 42,223,43%. Также обнаружены достоверные различия (р<0,05) между второй и четвертой группами, где их процент составил 51,032,82% и 42,23,43% соответственно. Так как в четвертой группе воздействие пиявками проводилось на более поздних этапах регенерации (60-е сутки после операции), это привело к существенному снижению склеротизации фиброзной ткани. По-видимому, стимулирующее действие на коллагенолиз обусловлено содержанием в слюне пиявок различных ферментов (гиалуронидазы, кининазы, дестабилазы, коллагеназы, апиразы и др.) [4, 5, 6].
О склеротизации тканей судят также по степени развития интерстиция [7]. В первой группе крыс удельная площадь интерстиция была достоверно меньше относительно этого показателя во второй, третьей и четвертой группах (р<0,05, р<0,01, р<0,05 соответственно). Сопоставление значений удельной площади интерстиция в опытных группах выявило также достоверные различия. Воздействие пиявками на 30-е и 60-е сутки приводит к преобладанию анализируемого показателя по сравнению с терапией на 20-е сутки (вторая группа – 18,581,01, третья группа – 24,852,51 (р<0,001) и четвертая группа 23,252,14 – (р<0,001). По-видимому, секрет слюнных желез пиявок воздействует на основное аморфное вещество соединительной ткани, приводя к разрушению гиалуроновой кислоты, разобщению связей и дезагрегации белковых молекул с гликозаминогликанами, которые являются составными компонентами основного аморфного вещества соединительной ткани [8].
Удельная площадь эластических волокон у контрольной и опытных групп крыс также существенно отличается. В первой группе относительный процент эластических волокон составил 13,610,83%, что достоверно ниже анализируемого показателя как во второй группе (15,190,14%, р<0,001), так в третьей (15,980,19%, р<0,01) и в четвертой (15,930,56%, р<0,05). Среди опытных групп животных можно отметить преобладание удельной площади эластических волокон в третьей группе (15,980,19%, р<0,01) и в четвертой (15,930,56%, р<0,05) над значениями во второй (15,190,14%, р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют о стимулирующем влиянии гирудотерапии на эластогенез в кожном регенерате.
В процессе преобразования рубца на последних этапах заживления кожной раны клеточные элементы соединительной ткани продуцируют компоненты основного аморфного вещества, коллагеновые и эластические волокна [9]. Нами выявлено, что значения удельной площади клеточных элементов у разных групп животных неоднозначны. Так, в четвертой группе крыс этот показатель достоверно ниже по сравнению с другими опытными и контрольной группами. У животных четвертой группы он составил 11,481,45%, в то время как у крыс третьей группы – 15,800,72% (р<0,01), а первой группы – 15,860,57% (р<0,01). Значения удельной площади клеточных элементов в первой группе достоверно выше (р<0,001), чем во второй (13,323,32%) и в четвертой группах (р<0,001).
Таким образом, гирудотерапия способствует снижению количества клеток фиброзной ткани, что влечет за собой меньшую склеротизацию, значительный коллагенолизис и существенный эластогенез. Поэтому применение Hirudo medicinalis для стимуляции репаративных процессов в кожной ране весьма перспективно. Однако воздействие пиявок на разных сроках регенерации вызывают неоднозначную реакцию со стороны компонентов кожного регенерата и это указывает на выбор определенного подхода использования пиявок для получения нужных результатов лечения.
Литература:
1. Суракова Т.В., Путинцев Е.В. Использование пиявок при заживлении экспериментальных кожных ран у крыс.- Экспериментально – гистологический анализ соединительных тканей и крови: Мат. науч. совещания, посвященного 125-летию со дня рождения А.А. Максимова.- Санкт-Петербург. – 1999.- С.75.
2. Суракова Т.В., Усатова Е.В. Морфометрические особенности кожного регенерата после гирудотерапии у крыс. - Сборник научных трудов «Медико-биологические, клинические и социальные вопросы здоровья и патологии человека». – Иваново. – 2000. – С. 82-85.
3. Суракова Т.В., Емелин Е.В., Терентьева М.Г., Путинцев Е.В. Влияние гирудотерапии на строение кожного регенерата у крыс.- Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии, вып.2.- Томск, 2002.-С. 172-173.
4. Гирудотерапия и гирудофармакотерапия / Под. Ред. Г.И.Никонова.-М., 1996.-120 с.
5. Golden M.A. et. al. Leech therapy in digital replantation. // AORN J. – 1995.- Sep.; 62(3): 364-6, 369, 371-2.
6. Rabinowits J.L. Salivary lipid profiles of the leech (Hirudo medicinalis). // J. Lipids.- 1996 Aug; 31 (8): 887-8.
7. Саркисов Д.С. Общие данные о морфологии раневого процесса / Д.С. Саркисов, А.А. Пальцин, Л.И. Музыкант, Е.Г. Колокольчикова, Б.В. Втюрин, Г.Н. Дудникова // Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей. / Под. Ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченка. – М.: Медицина, 1990. – С. 38-86.
8. Бычков С.М., Кузьмина С.А. Биологическая роль гиалуроновой кислоты (обзор) // Вопр. мед.химии. – 1986. – Т. 31, №1-2. – С. 19-32.
9. Bertelli A. Wound hialing: the present and the future development of the research // Int. J. Tissue React.- 1988.-V.10, N 6.- P. 387-388.
